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利用高效液相色谱实验室检测羟脯氨酸等氨基酸含量的方法分享

利用高效液相色谱实验室检测羟脯氨酸等氨基酸含量的方法分享

时间:2022-08-17 11:48:56 作者:华体会官网在线登录 来源:华体会平台登录
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  羟脯氨酸(HYP)是一种亚氨基酸,不属于20种常见的氨基酸,通常在脯氨酸的第4位上带有羟基,是胶原蛋白的主要组成成分,而在其他蛋白质中含量甚微,这使得它几乎成为胶原蛋白所特有的成分,因而可通过测定羟脯氨酸含量来计算胶原蛋白的含量。较为常见的检测方羟脯氨酸法是氯胺T法,但由于灵敏度低,影响因素较多,应用较少。

  高效液相色谱(HPLC)作为现代的高效的分析技术,原理是凭借各组分之间的各种自身性质的差别使得各组分的排阻作用的不同,进而各组分辗转于流动相和固定相间,从而不同组分得以分离的超高效色谱技术。查阅文献资料微源实验室分享一种利用高效液相色谱检测羟脯氨酸含量的检测方法。

  检测流动相为乙腈-0.05%三氟乙酸水溶液,流速为1.0mL/min;柱温为室温;进样体积为10μL,以0.2mL/min的分流速度进质谱检测器;离子源选择电喷雾离子化正离子采集模式(ESI+);离子监测模式(SIM)。

  方法精密称取58.5mg标准品于50mL容量瓶中,加水溶解定容,得标准储备液。精密吸取不同体积的标准溶液,加入相同体积的内标物溶液,适量稀释至质量浓度不同的标准系列溶液取。样品经过处理后称取0.0520g,加6mol/L盐酸-0.5%苯酚溶液10mL,线h,待挥干溶剂后加水溶解,加入内标物溶液5mL,加水定容至25mL,过0.45μm纤维素微孔滤膜,滤液直接进高效液相色谱/质谱仪检测。得到样品、内标后样品的选择离子的质量色谱图。

  通过高效液相色谱-质谱联用的方法,得到实验过程的线性关系良好,重现性良好,充分利用了液相色谱的分离能力和质谱的定性定量能力,节省了样品的处理时间和分析时间。测定药物样品中羟脯氨酸含量时所用到的流动相简单,实验分析时间短,且无需对样品进行衍生,操作简便,定量准确,重现性好,抗干扰能力强,可以用于实际样品的测定。

  胶原蛋白具有良好的生物相容性、可生物降解性以及生物活性,在生物医药领域的应用较为广泛。微源检测提供高效液相色谱、蛋白来源杂质检测等检测项目,遵照ISO17025和GMP进行实验室管理,拥有百余台精密检测仪器,申请并通过了中国计量认证(CMA)资质认定,为药品生产过程中可能产生的杂质提供评估报告、方法开发、验证及样品检测等系列完整的解决方案。更多检测相关问题欢迎私信以及评论区留言!